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如何準(zhǔn)備用于生長(zhǎng)促進(jìn)曲線測(cè)定的細(xì)胞

更新時(shí)間:2017-08-01  |  點(diǎn)擊率:1379

  要進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定,來(lái)反映FBS的功能,需要先準(zhǔn)備足夠的有活力的細(xì)胞。締一生物/締一生物根據(jù)美國(guó)藥典(USP)的描述分析如何準(zhǔn)備用于生長(zhǎng)促進(jìn)曲線測(cè)定的細(xì)胞。

 

如何準(zhǔn)備用于生長(zhǎng)促進(jìn)曲線測(cè)定的細(xì)胞

 

  用37℃水浴快速解凍一管FBS。計(jì)數(shù)細(xì)胞并觀察活力。用添加FBS的*培養(yǎng)基在37℃培養(yǎng)細(xì)胞,具體遵循ATCC對(duì)相應(yīng)細(xì)胞提供的指導(dǎo)。鏡下觀察,保證細(xì)胞均一分布,貼壁或懸浮接近長(zhǎng)滿。細(xì)胞再傳代,直至培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)足夠用于檢測(cè)(總細(xì)胞數(shù)需要1X107個(gè),活力大于90%)。

  收獲細(xì)胞時(shí),先棄掉上清,用不含F(xiàn)BS的培養(yǎng)基沖洗;對(duì)貼壁細(xì)胞,加1 mL of Trypsin/EDTA消化,必要時(shí)用1ml不低于10%FBS的培養(yǎng)基中和。離心,棄上清,細(xì)胞重懸。此時(shí),細(xì)胞即可用于接種。

  接種細(xì)胞時(shí),應(yīng)測(cè)試*的接種密度,起始密度范圍為2×103~2×104活細(xì)胞/mL。選取至少5個(gè)時(shí)間點(diǎn),3個(gè)復(fù)孔,以確定細(xì)胞*接種密度。在37℃,5%CO2的培養(yǎng)箱孵育。對(duì)7天內(nèi)的每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行拍照(第0,1,2,3,4,7天)。應(yīng)采用待測(cè)試的血清和USP的參考血清,測(cè)試三種血清濃度。記錄下每種條件下細(xì)胞的匯合度。在預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)上收獲細(xì)胞。對(duì)細(xì)胞總數(shù)和活力進(jìn)行計(jì)數(shù)。

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