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關(guān)于SFRE 199細胞培養(yǎng)基的研究

更新時間:2018-11-20  |  點擊率:1224

SFRE 199,是對M199培養(yǎng)基的改良型,初研發(fā)是為了生長和維持培養(yǎng)Bak細胞(原代狒狒腎細胞)。SFRE 199分為I型和II型,即SFRE 199-1和SFRE 199-2。

 

SFRE 199與M199的不同點在于升高了8種氨基酸(精氨酸-鹽酸、半胱氨酸、胱氨酸、L -谷氨酰胺、L -谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸)和葡萄糖的濃度,并加入硫酸鋅、丙酮酸鈉和魚精蛋白鋅胰島素。另外,還降低了硝酸鐵、黃嘌呤和碳酸氫鈉的濃度。SFRE 199-1與SFRE 199-2的不同在于,前者含有Hank's鹽,而后者所含為Earle's鹽。

 

SFRE-199將M199標準配方中的精氨酸增加到150mg/L,半胱氨酸增至4mg/L,胱氨酸增至40mg/L,谷氨酰胺增至300mg/L,谷氨酸增至75mg/L,甘氨酸增至100mg/l,組氨酸增至40mg/L,酪氨酸增至80mg/L,以獲得大的細胞生長而未表現(xiàn)出毒性。與加胎牛血清的常規(guī)培養(yǎng)基比較,細胞生長速率、產(chǎn)量和蛋白容量均相同。均在移植后第6天單層細胞達到充分融合。

 

有報道,在SFRE 199-1生長的原代Bak細胞的群體二倍分裂時間(PDT)約為34.2小時,與加有5%牛血清的HLH(含水解乳白蛋白的HBSS)相同,加有3%胎牛血清的M199的PDT為36小時。如果在SFRE 199-1中去除胰島素或硫酸鋅,則細胞不能融合,PDT延長。若含有胰島素和硫酸鋅,則其支持生長的能力相當(dāng)于標準對照血清培養(yǎng)基。

 

SFRE 199培養(yǎng)基中除了葡萄糖,還添加了半乳糖,以避免乳酸過度積累。實驗發(fā)現(xiàn),添加的D(+)—半乳糖1000mg/L,可使乳酸合成降低54.5%,在21天的觀察期間培養(yǎng)基的pH保持穩(wěn)定(7.3-7.4)。若培養(yǎng)基pH降到6.8,則培養(yǎng)很難維持。

 

HiMedia公司生產(chǎn)的SFRE 199培養(yǎng)基不含胰島素和碳酸氫鈉,需在使用前單獨添加。建議用1N HCl或1N NaOH將pH調(diào)低理想pH值的0.2-0.3個pH單位,因為過濾會使pH值略微升高。根據(jù)需要,還可以無菌添加其他成分,以保證個性培養(yǎng)基的優(yōu)化。

 

SFRE 199培養(yǎng)基有多種應(yīng)用。除培養(yǎng)Bak細胞外,有報道用不加血清的SFRE-199-2培養(yǎng)牛輸卵管峽部上皮細胞和壺腹上皮細胞,體外研究牛的受孕過程。也有報道用SFRE 199-1無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)Vero細胞效果較優(yōu)。而Vero細胞常用于狂犬病疫苗,乙腦疫苗等的生產(chǎn)。因此,SFRE 199培養(yǎng)基具有極大的作為無血清培養(yǎng)基用于疫苗生產(chǎn)的潛力。

 

締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商,在細胞培養(yǎng)、微生物培養(yǎng)及檢測領(lǐng)域,一如既往地為您帶來的服務(wù)。

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