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如何評(píng)價(jià)和選擇支原體檢測(cè)試劑盒

更新時(shí)間:2019-11-11  |  點(diǎn)擊率:1519

要選一款合適的支原體檢測(cè)試劑盒,有如下幾個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo):

 

1. 靈敏度。

靈敏度常用支原體基因組的拷貝數(shù)或支原體菌株的CFU表示。

 

2. 特異性和廣譜性。

質(zhì)量好的試劑盒應(yīng)檢測(cè)的支原體物種越多越多,并且特異性強(qiáng),即只針對(duì)支原體,不針對(duì)其他細(xì)菌等微生物,沒(méi)有交叉反應(yīng)。

 

3. 穩(wěn)定性。

凍干粉比液體試劑的穩(wěn)定性高。

 

4. 樣本類(lèi)型及樣本處理。

一款好的試劑盒,會(huì)標(biāo)出它適合的樣本類(lèi)型,也會(huì)說(shuō)明如何處理樣本。要注意有的樣本含有抑制PCR反應(yīng)的物質(zhì),因此需要處理。

 

5. 對(duì)照品。

一個(gè)好的試劑盒,會(huì)帶有陽(yáng)性對(duì)照和內(nèi)控對(duì)照。內(nèi)控對(duì)照是用于監(jiān)測(cè)PCR是否正常。如果樣本含有抑制PCR的物質(zhì),則內(nèi)控對(duì)照的條帶會(huì)發(fā)生缺失。有嚴(yán)重支原體污染的樣本由于樣本中的支原體對(duì)內(nèi)控對(duì)照產(chǎn)生了競(jìng)爭(zhēng)性抑制,因此支原體條帶越強(qiáng),內(nèi)控條帶越弱(下圖)。


圖. 1. 100 bp DNA Ladder;2. 陰性對(duì)照,有內(nèi)控條帶;3. 陽(yáng)性對(duì)照,有支原體陽(yáng)性條帶;4. 樣本有PCR抑制劑;5.陰性樣本;6.陽(yáng)性樣本,支原體污染較輕;7.陽(yáng)性樣本,支原體污染較重。圖片來(lái)自Minerva Biolabs公司生產(chǎn)的Venor®GeM Advance支原體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

 

但支原體核酸檢測(cè)法(NAT)并沒(méi)有載入我國(guó)藥典。我們藥典的是支原體培養(yǎng)法和DNA染色法。但2018年《中國(guó)藥事》第8期上,中國(guó)食品藥品檢定研究院刊發(fā)了一篇文章——《支原體檢查的核酸檢測(cè)方法及方法學(xué)驗(yàn)證的思考》,提出提出要與接軌,逐漸推進(jìn)NAT的開(kāi)展,因其“具有快速、靈敏、便捷等特點(diǎn)”。

 

歐洲藥典規(guī)定,核酸法如替代培養(yǎng)基,核酸法的靈敏度需達(dá)到10 CFU·mL-1;如替代DNA染色法,核酸法的靈敏度需達(dá)到100 CFU·mL-1。該文也提出,需對(duì)NAT進(jìn)行特異性、低檢出限和耐用性的驗(yàn)證。

 

因此,對(duì)于需要NAT法檢查支原體的生物制品和細(xì)胞治療產(chǎn)品企業(yè),可選擇試劑盒已經(jīng)驗(yàn)證并提供有參比物質(zhì)的廠家,盡管后續(xù)仍需按照待測(cè)樣本類(lèi)型進(jìn)行方法的適用性驗(yàn)證,并同步開(kāi)展藥典方法的平行檢測(cè)研究,但已為NAT法檢查支原體帶來(lái)極大的方便。

 

Minerva Biolabs公司是的微生物污染控制公司,創(chuàng)始人來(lái)自于德國(guó)的羅伯特·科赫微生物研究所。其支原體檢測(cè)和祛除產(chǎn)品,在世界上居于位置。其中提供的用于藥品或生物制品企業(yè)過(guò)程控制的試劑盒和標(biāo)準(zhǔn)品如下:

 

(qPCR法)支原體檢測(cè)試劑盒

英文品名: Venor®GeM qEP

貨號(hào)與規(guī)格: 11-9025,25 tests/盒

              11-9100,100 tests/盒

              11-9250,250 tests/盒

 

(PCR法)支原體檢測(cè)試劑盒

注:不含聚合酶

英文: Venor® GeM Classic

貨號(hào)與規(guī)格: 11-1025,25 tests/盒

             11-1050,50 tests/盒

             11-1100,100 tests/盒

             11-1250,250 tests/盒

 

10CFU支原體靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品

品名:10CFU™ Sensitivity Standards

產(chǎn)品

貨號(hào)

規(guī)格

NCTC

ATCC

精氨酸支原體

102-1003

3管10CFU支原體標(biāo)準(zhǔn)品+2管陰性對(duì)照/盒

10129

23838

口腔支原體

102-2003

10112

23714

雞敗血支原體

102-3003

10115

19610

肺炎支原體

102-4003

10119

15531

關(guān)節(jié)液支原體

102-5003

10124

25204

發(fā)酵支原體

102-6003

10117

19989

豬鼻支原體

102-7003

10130

17981

萊氏無(wú)膽甾原體

102-8003

10116

23206

螺原體

102-9003

10164

27556

支原體套裝

(包含EP 2.6.7/ JP17版G3章列舉的所有支原體物種)

102-0002

2管10CFU支原體標(biāo)準(zhǔn)品+2管陰性對(duì)照/盒

--

--

 

100CFU支原體靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品

品名:100CFU™ Sensitivity Standards

產(chǎn)品

貨號(hào)

規(guī)格

NCTC

ATCC

精氨酸支原體

103-1003

3管10CFU支原體標(biāo)準(zhǔn)品+2管陰性對(duì)照/盒

10129

23838

口腔支原體

103-2003

10112

23714

雞敗血支原體

103-3003

10115

19610

肺炎支原體

103-4003

10119

15531

關(guān)節(jié)液支原體

103-5003

10124

25204

發(fā)酵支原體

103-6003

10117

19989

豬鼻支原體

103-7003

10130

17981

萊氏無(wú)膽甾原體

103-8003

10116

23206

唾液支原體

103-1103

10113

23064

注意:

1
使用時(shí),應(yīng)嚴(yán)格遵循說(shuō)明書(shū)操作流程。任何偏離可能會(huì)造成結(jié)果誤差。

2
加入100CFU標(biāo)準(zhǔn)品的樣品不能超濾濃縮,否則會(huì)導(dǎo)致結(jié)果不可靠。

3
100CFU/ml不能稀釋為10CFU/ml,因支原體存在集聚現(xiàn)象,在溶液中非均一狀態(tài)。

 

上海締一生物生物科技有限公司作為Minerva公司中國(guó)區(qū)總代理,十幾年來(lái),不斷為中國(guó)生物研究實(shí)驗(yàn)室,以及眾多生物制品企業(yè),提供了完整的支原體等微生物檢測(cè)及祛除解決方案。如有任何需求,可與我們聯(lián)系。

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