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淺談透析胎牛血清的作用

更新時間:2020-04-28  |  點擊率:1048

胎牛血清參與細胞培養(yǎng),是細胞生長天然的培養(yǎng)基,它為細胞提供激素、生長因子、結(jié)合蛋白、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、黏附和鋪展因子等來促進體外細胞培養(yǎng)。但是在一些特殊的研究中也會使用到透析胎牛血清,我們來了解下透析胎牛血清的作用。

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透析胎牛血清主要用于可能需要關注小分子濃度的特殊研究。這主要包括四個領域:蛋白質(zhì)組學、同位素標記、細胞通訊以及報告基因細胞系的篩選,其中有些領域是相互交叉的。以下稍作舉例。

 

細胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標記技術(shù)(簡稱SILAC)。

這是一項以質(zhì)譜為基礎的定量蛋白質(zhì)組學技術(shù),全稱為Stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC)。它將13C或15N標記的氨基酸摻入到培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞,來標記細胞內(nèi)新合成的蛋白質(zhì),一般培養(yǎng)5-6代,細胞中的蛋白質(zhì)將都被同位素標記。然后質(zhì)譜分析,即可比較經(jīng)過不同處理的細胞,其內(nèi)部蛋白質(zhì)豐度的變化。它還可用于正常細胞與病理狀態(tài)細胞二者的比較。為避免胎牛血清中天然氨基酸的干擾,這時就需要用到透析胎牛血清,以保證摻入細胞蛋白中的氨基酸均為標記氨基酸(常采用賴氨酸或精氨酸)。

 

工程細胞株的篩選。

以常見的工程細胞株CHO-DFGRˉ為例,該細胞自身缺乏二氫葉酸還原酶(DHFR),必須在添加了次黃嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸的培養(yǎng)液中才能得以存活。如將含有目的基因與DHFR基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞,則可以得到在不含上述添加劑的培養(yǎng)基上也能生長的細胞克隆。通過甲氨蝶呤(MTX)進一步篩選,可進一步得到能表達大量目的蛋白的細胞克隆。這時的胎牛血清由于不含有次黃嘌呤和胸腺嘧啶等,也常作為選擇培養(yǎng)基的一部分,參與陽性轉(zhuǎn)染細胞克隆的篩選。

 

研究某些因子如核苷酸或微量元素如硒、鋅對某種類型細胞增殖、分化的影響。

這時也需要用透析胎牛血清,以避免培養(yǎng)體系中天然存在的這些物質(zhì)的干擾。

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