公车上拨开丁字裤进入电影,久久99精品久久久久久无毒不卡,国产丰满老熟妇乱XXX1区,夜夜爽妓女8888视频免费观看

當(dāng)前位置:首頁  >  技術(shù)文章  >  qPCR檢測支原體方法略述

qPCR檢測支原體方法略述

更新時(shí)間:2020-11-09  |  點(diǎn)擊率:858

和PCR比起來,qPCR不用跑膠,實(shí)時(shí)監(jiān)測擴(kuò)增狀況,操作更為便捷。下面以德國MB Venor®GeM支原體檢測試劑盒(qPCR一步法)Venor®GeM qOneStep)為例,略述檢測原理和過程。

 

   該試劑盒包括4管試劑,其中2管分別為緩沖液和PCR水,另2管為主要試劑。1管即mix,含引物、核苷酸、聚合酶、熒光素標(biāo)記的探針和內(nèi)部擴(kuò)增對(duì)照。另1管為陽性對(duì)照,均為凍干粉。

 

它通過擴(kuò)增高度保守的rRNA操縱子,或者更準(zhǔn)確地說,擴(kuò)增支原體基因組中的16S rRNA編碼區(qū),可以特異性地檢測支原體。在520nm(FAMTM通道)檢測支原體特異性擴(kuò)增片段。在610nm(HEXTM通道)檢測內(nèi)部擴(kuò)增對(duì)照的擴(kuò)增。它能特異性檢測所有導(dǎo)致細(xì)胞污染的柔膜體物種。真核DNA不會(huì)被擴(kuò)增。通過內(nèi)部對(duì)照,可檢測PCR抑制劑的存在或不正確的DNA提取引起的假陰性結(jié)果。樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清液。檢測程序可在3小時(shí)內(nèi)完成。

在檢測前,樣本需要一定的制備。具體是將100μl細(xì)胞培養(yǎng)上清液轉(zhuǎn)移至無菌的1.5 ml反應(yīng)管中。關(guān)上蓋子扣緊。將樣品在95°C下孵育5分鐘。以大速度短暫離心樣品(15秒)以沉淀任何細(xì)胞碎片。然后可直接取2μl上清液進(jìn)行qPCR。

 

qPCR反應(yīng)體系一共是25ul,其中樣本2ul,其余是master mix。注意設(shè)置陽性對(duì)照、陰性對(duì)照(無模板對(duì)照)。

 

如果檢測的Ct<40,則表明PCR結(jié)果陽性。如果檢測的Ct≥40,則PCR反應(yīng)結(jié)果為陰性。如果FAM陽性,則支原體陽性。如果FAM陰性,HEX也陰性,表明PCR擴(kuò)增出了問題,需要重做。如果FAM陰性,HEX陽性,表明支原體確實(shí)陰性。

 

PCR擴(kuò)增出了問題主要原因?yàn)镻CR反應(yīng)被抑制了,可能需要考慮做DNA抽提。

 

在qPCR反應(yīng)中,引物和探針的設(shè)計(jì)尤為重要,它既需要覆蓋大多數(shù)支原體,又需要不與細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。當(dāng)然,Taq酶的性能也很重要,因?yàn)镈NA的擴(kuò)增終依賴于酶的活性和擴(kuò)增的速度。從這個(gè)角度說,一個(gè)好的qPCR試劑盒是各個(gè)因素共同作用的結(jié)果。

色综合久久无码五十路人妻| 亚洲综合久久日日躁综合| 亚洲午夜AV久久久精品影院色戒| 性xxxx欧美孕妇奶水| 欧美视频| 天天夜夜草草久久伊人69堂| 亚洲国产精品18久久久久久| (原创)露脸自拍[62P]| 高潮VIDEOSSEX潮喷另类| 国产免费观看黄A片又黄又硬| 天天躁日日躁AAAAXXXX| 男女18禁啪啪无遮挡激烈网站| 日本激情公妇厨房嗯嗯| 狠狠色噜噜狠狠狠8888米奇 | 扒开美女内裤狂揉下部| 我和子的与子乱视频| 辽宁老妓女叫床高潮| 呦系列视频一区二区三区| 亚洲欧美激情精品一区二区| 精品亚洲成A人在线观看青青 | 亚洲最大成人网| 欧美《熟妇的荡欲》在线观看| 色戒汤唯电影无删减版梁朝伟| 永久免费观看不收费的软件 | 国产成人精品三上悠亚久久 | 精品久久久久久亚洲偷窥一区| 极品丝袜乱系列全集大全目录| 办公室欧美大尺寸suv| 丰满岳乱妇在线观看中字无码| 极品少妇XXOO无码播放| 日本三级片电影| 国产高潮国产高潮久久久| 久久久久99精品成人片直播| 脱了内裤猛烈进入A片视频免费| 久久日本片精品AAAAA国产| 欧美AV在线观看| 亚洲av久久无码| 国产韩国日本欧美的品牌SUV| 粗大的内捧猛烈进出小视频| 第一次破了女处小红| 成人家庭影院|