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細胞傳代培養(yǎng)的原理及操作步驟-胎牛血清助力科研實驗

更新時間:2021-10-25  |  點擊率:1238

細胞傳代培養(yǎng)原理

細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續(xù)生長,同時也將細胞數(shù)量擴大,就必須進行傳代(再培養(yǎng))。

傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

細胞傳代培養(yǎng)具體操作

1、材料和試劑的準備

1)細胞:貼壁細胞株

2)試劑:0.25%胰酶、1640培養(yǎng)基(含10%小牛血清)

3)儀器和器材:倒置顯微鏡,培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等

2、操作步驟

1)將長滿細胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。

2)加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底細胞都浸入溶液中。

3)瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移,原貼壁的細胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時將胰酶棄去,加入10ml培養(yǎng)液終止消化。

觀察消化也可以用肉眼,當見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。

4)用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。

科研實驗中,細胞的體外培養(yǎng)一直是一個重要環(huán)節(jié)。細胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如Ausbian®特級胎牛血清,它適合各種細胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細胞,如:干細胞、肝細胞,神經(jīng)細胞,原代培養(yǎng)、細胞融合、轉(zhuǎn)染細胞等。

Ausbian®特級胎牛血清所有血清出廠前,均經(jīng)過嚴格質(zhì)控,每個批次附有詳細完整的《檢測報告》,包括:品名,貨號,批號,血源地,生產(chǎn)日期,保質(zhì)期,pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內(nèi)毒素、無菌檢查(細菌、真菌、支原體)、病毒檢查(如BVD、牛腺病毒、細胞病變效應等)、促細胞生長能力、細胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。

實驗人對于新批次血清,應認真審閱《檢測報告》,做好試用前篩選第一步。(如何看懂《檢測報告》,可登陸“締一生物"網(wǎng)站,留言技術(shù)部,得到免費幫助。)

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