1、首先講一下細(xì)胞生長緩慢的原因：

a)更換了血清或者培養(yǎng)基，細(xì)胞需要一段時(shí)間適應(yīng)一下；

b)由于細(xì)胞的特殊種類，培養(yǎng)基中缺少某些生長因子；

c)培養(yǎng)基中有少量真菌或者細(xì)菌污染；

d)傳代的時(shí)候細(xì)胞密度過低；

e)細(xì)胞狀態(tài)老化；

f)支原體污染。

2、解決上述問題的方法：

a)如果實(shí)驗(yàn)室沒有某種細(xì)胞最適宜的培養(yǎng)基，可以先用原培養(yǎng)條件凍存一些，然后逐漸增加新的培養(yǎng)基比例，25%、50%、75%到100%，傳代3-5次后，讓細(xì)胞慢慢適應(yīng)。

b)判斷是不是培養(yǎng)基發(fā)生污染，可以先不加抗生素，觀察細(xì)胞狀態(tài)。

c)增加細(xì)胞的接種密度。

d)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞老化的時(shí)候，及時(shí)更換新的細(xì)胞。

e)如果懷疑是支原體污染，一定要隔離疑似污染的培養(yǎng)皿，及時(shí)清潔消毒孵箱。

3、造成細(xì)胞死亡的原因：

a)細(xì)胞消化過度；

b)沒有及時(shí)換液，營養(yǎng)成分消耗殆盡；

c)如果前一天細(xì)胞的狀態(tài)很好，換液之后就全死了，應(yīng)該考慮是否是培養(yǎng)基或者血清的問題。

4、如何判定細(xì)胞是否發(fā)生支原體污染：可以選用直接培養(yǎng)法、熒光染色或PCR方法檢測，比較常用的是PCR。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生支原體污染時(shí)，原則上是能夠去除支原體的，但是整個(gè)過程耗時(shí)耗力，還要考驗(yàn)個(gè)人操作能力。所以如果不是處于細(xì)胞存量很少的情況下，建議發(fā)現(xiàn)污染時(shí)立刻棄掉，重新培養(yǎng)。

5、如果孵箱中只是某種細(xì)胞持續(xù)性大量死亡，而其他細(xì)胞狀態(tài)都沒問題的話，基本上可以確定就是孵箱存在特異性感染這類細(xì)胞的真菌或細(xì)菌，遇到這種情況，小六兒也不知道該怎么做，只能是先停一段時(shí)間看看。。。。。。

6、其他注意事項(xiàng)：每個(gè)星期都要更換孵箱底盤中的水（紫外照射后超純水）；每兩周消毒一次孵箱：75%酒精擦拭一遍后，再用0.1%新潔爾滅擦拭一遍（都用超純水配制）；可以在孵箱底部放一個(gè)燒杯，里面放入飽和硫酸銅，可以抑制霉菌生長。不過也有人說硫酸銅會(huì)改變孵箱的PH值，如果不是孵箱污染的情況很嚴(yán)重，建議不要使用。

科研實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好，就要用好血清，如Ausbian®特級胎牛血清，它適合各種細(xì)胞培養(yǎng)，尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞，如：干細(xì)胞、肝細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞，原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等。

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實(shí)驗(yàn)人對于新批次血清，應(yīng)認(rèn)真審閱《檢測報(bào)告》，做好試用前篩選第一步。（如何看懂《檢測報(bào)告》，可登陸“締一生物"網(wǎng)站，留言技術(shù)部，得到免費(fèi)幫助。）

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