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常規(guī)細胞實驗大匯總~細胞增殖實驗

更新時間:2022-04-28  |  點擊率:1228

在很多課題中,細胞實驗都是*的。除了之前我們介紹的細胞復(fù)蘇、傳代和凍存這“基礎(chǔ)三件套"之外,還有許多常見的操作,需要我們了解甚至是熟練掌握。

今天我們就來盤點一下,那些助力高分文章發(fā)表的細胞實驗技術(shù)(第一期)。

細胞增殖實驗

MTT法:又稱MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。

檢測原理:

活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲臜(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲臜,用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。

用途:廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。

特點:靈敏度高、經(jīng)濟。


CCK-8法:又稱細胞增殖和細胞毒性實驗

檢測原理:

該試劑中含有WST-8,在電子載體1-Methoxy PMS的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物(Formazan dye)。生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。

用途:廣泛用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗等。

特點:對細胞毒性小,可以多次測定選取最佳測定時間;檢測迅速;靈敏度高。


BrdU法:直接測定進行分裂的細胞數(shù)來評價細胞增殖能力

檢測原理:

用BrdU預(yù)處理的細胞中,BrdU可代替胸腺嘧啶核苷插入復(fù)制的DNA雙鏈中,而且這種置換可以穩(wěn)定存在,并帶到子代細胞中。細胞經(jīng)過固定和變性處理后,可用免疫學(xué)方法檢測DNA中BrdU的含量(如采用鼠抗BrdU單克隆抗體特異識別BrdU,再采用辣根過氧化酶標(biāo)記的山羊抗鼠IgG二抗標(biāo)記,最后用比色法或熒光的方法進行定量測定),從而判斷細胞的增殖能力。

用途:可判斷增殖細胞的種類,增殖速度,對研究細胞動力學(xué)有重要意義。

特點:簡單、快速、安全,檢測的敏感性好;適合于大塊組織的快速檢查,尤適于定量研究;BrdU既可用于活體標(biāo)記,亦可用于細胞或組織細胞增殖、分化的標(biāo)記。副作用低;此方法的缺點是標(biāo)記時間較短。


EDU法:檢測細胞增殖的方法

檢測原理:

EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物,能夠在細胞增殖時期代替T滲入正在復(fù)制的DNA分子,通過基于EdU與熒光染料的特異性反應(yīng)檢測DNA復(fù)制活性,通過檢測EdU標(biāo)記便能準(zhǔn)確地反映細胞的增殖情況。與BrdU檢測方法相比,EdU檢測方法更快速、更靈敏、更準(zhǔn)確。EdU檢測染料只有BrdU抗體大小的1/500,在細胞內(nèi)很容易擴散,無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)即可有效檢測,可有效避免樣品損傷,在細胞和組織水平能更準(zhǔn)確地反映細胞增殖等現(xiàn)象。

用途:在細胞水平上EdU對增殖細胞的標(biāo)記,對植物增殖細胞進行標(biāo)記并檢測、細胞示蹤實驗等。

特點:EdU法檢測細胞增殖,無需抗體,無變性步驟,保持細胞形態(tài)和DNA完整性。

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