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血清質(zhì)量的鑒定一般包括哪幾個(gè)方面?

更新時(shí)間:2022-05-25  |  點(diǎn)擊率:579

理化性質(zhì):如滲透壓、pH值、蛋白電泳圖譜、蛋白含量、激素水平、內(nèi)毒素等。蛋白含量包括血清總蛋白含量(不低于35-45g/L)、球蛋白含量(應(yīng)小于20g/L)、血紅蛋白含量等。其中球蛋白含量是一項(xiàng)非常重要的指標(biāo),血清中球蛋白主要是抗體,球蛋白含量越低血清質(zhì)量越高。血紅蛋白也是越低越好。

微生物檢測:包括細(xì)菌、真菌、支原體、病毒等。特別是對支原體、病毒的檢測,支原體是一種很小的微生物,可通過孔徑22u的濾膜。支原體、病毒污染在光學(xué)顯微鏡下難于察覺,細(xì)胞也能生長繁殖,但會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。檢測支原體的方法很多,如培養(yǎng)法、PCR法、熒光染色法、電鏡觀察法等。

促生長的效果:這是血清重要的特性,應(yīng)當(dāng)以培養(yǎng)的細(xì)胞來檢測。有兩種方法:克隆形成率、貼瓶率測定法和連續(xù)傳代培養(yǎng)法。

(1)克隆形成率測定:一般以懸浮生長的細(xì)胞為培養(yǎng)對象,按有限稀釋法做克隆化培養(yǎng),將不同批號的血清配制成不同濃度的培養(yǎng)基,細(xì)胞也稀釋成不同濃度,接種到96孔板,每孔200ul,培養(yǎng)一定時(shí)間,統(tǒng)計(jì)有克隆生長的孔,計(jì)算出百分比,再與對照的標(biāo)準(zhǔn)血清相比較,就可看出不同批號血清間的區(qū)別。比較低的濃度,更能觀察出血清質(zhì)量間的細(xì)微差別。

(2)貼瓶率測定:是以貼壁細(xì)胞為培養(yǎng)對象,將細(xì)胞稀釋至低密度,接種至平皿,每皿200或100個(gè)細(xì)胞,以不同濃度的血清培養(yǎng)基培養(yǎng),培養(yǎng)一定時(shí)間后棄培養(yǎng)基,染色后統(tǒng)計(jì)集落數(shù),計(jì)算出集落數(shù)占接種細(xì)胞數(shù)的百分比,同樣再與標(biāo)準(zhǔn)血清比較,判斷血清質(zhì)量高低。

(3)連續(xù)傳代培養(yǎng)法:是將細(xì)胞培養(yǎng)于3個(gè)一定體積的培養(yǎng)瓶中,待測血清配制為5%濃度,一般于第七天收集細(xì)胞,計(jì)數(shù),取平均值,中間可以更換一次培養(yǎng)基。連續(xù)測試三個(gè)周期以上,觀察細(xì)胞生長狀況,并將每次的計(jì)數(shù)結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)血清的測試結(jié)果比較。

對于使用者,判斷血清質(zhì)量先從外觀入手。好的血清應(yīng)該是透明清亮,土黃色或棕黃色,無沉淀或少沉淀,比較粘稠。如發(fā)現(xiàn)血清渾濁、不透明、含許多沉淀物,說明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性;若血清呈棕紅色,說明血清中的血紅蛋白含量太高,取材時(shí)有溶血現(xiàn)象;如果搖晃時(shí)感覺液體稀薄,說明血清中摻入的生理鹽水太多。如果要進(jìn)一步了解血清的質(zhì)量,則應(yīng)連續(xù)培養(yǎng)某些細(xì)胞,觀察細(xì)胞生長狀況。

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