公车上拨开丁字裤进入电影,久久99精品久久久久久无毒不卡,国产丰满老熟妇乱XXX1区,夜夜爽妓女8888视频免费观看

當(dāng)前位置:首頁(yè)  >  技術(shù)文章  >  干細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)方法是什么?

干細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)方法是什么?

更新時(shí)間:2022-09-14  |  點(diǎn)擊率:830

干細(xì)胞是一類(lèi)具有無(wú)限的或者永生的自我更新能力的細(xì)胞、能夠產(chǎn)生至少一種類(lèi)型的、高度分化的子代細(xì)胞[1]。

干細(xì)胞被認(rèn)為可以提供一種理想的生物學(xué)平臺(tái), 用于多方面的科學(xué)研究與臨床應(yīng)用, 如藥物篩選平臺(tái)的建立、細(xì)胞發(fā)育與分化的分子調(diào)節(jié)機(jī)制研究、基因靶向敲除動(dòng)物模型的構(gòu)建、組織工程種子細(xì)胞及基因治療載體的建立、細(xì)胞治療及再生醫(yī)學(xué)等[2]。

干細(xì)胞研究離不開(kāi)干細(xì)胞的培養(yǎng)。合格的干細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程,包括促進(jìn)其分裂增殖和維持其未分化狀態(tài)。

基于以上兩點(diǎn)要求,目前主流的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)方法為飼養(yǎng)層培養(yǎng)法:

即在有絲分裂失活的飼養(yǎng)層細(xì)胞 (FEEDER) 上培養(yǎng)干細(xì)胞。培養(yǎng)體系一般為高糖DMEM,添加適量的胎牛血清 (FCS) 及白血病抑制因子 (LIF)、L-谷氨酰胺等添加劑。

另外,為了避免外源性物質(zhì)的干擾(如血清、病原等成分)[3],又嘗試及建立了其他培養(yǎng)基, 包括條件培養(yǎng)基 (CM) 、無(wú)飼養(yǎng)層、無(wú)血清、血清替代物 (SR) 非條件培養(yǎng)基等。

其中無(wú)血清培養(yǎng)基中添加了更多珍貴的細(xì)胞因子,而血清替代物培養(yǎng)基則采用人工/半人工合成分子替代物的形式,來(lái)替代血清,成本相較于普通胎牛血清*培養(yǎng)基而言,高出不少。

01

飼養(yǎng)層培養(yǎng)法

目前認(rèn)為,飼養(yǎng)層能夠提供干細(xì)胞接觸所必需的復(fù)雜蛋白分子。自1981年EVANS等人[4]用飼養(yǎng)層成功培養(yǎng)了mESC起,飼養(yǎng)層培養(yǎng)法便開(kāi)始不斷發(fā)展。實(shí)驗(yàn)過(guò)程,主要分為以下三步:配制飼養(yǎng)層細(xì)胞培養(yǎng)基、準(zhǔn)備飼養(yǎng)層細(xì)胞、配制飼養(yǎng)單層細(xì)胞培養(yǎng)基、飼養(yǎng)單層制備、配制干細(xì)胞培養(yǎng)基、接種干細(xì)胞培養(yǎng)。

飼養(yǎng)層培養(yǎng)法卻存在著不可避免的缺點(diǎn):

1、 飼養(yǎng)層細(xì)胞生命期有限,不能在體外長(zhǎng)期傳代。在體外傳代時(shí)間太長(zhǎng),其產(chǎn)生促增殖因子和抑制分化因子的能力會(huì)減弱甚至喪失。

2、 MEF細(xì)胞的染色體干擾:飼養(yǎng)層細(xì)胞會(huì)影響干細(xì)胞遺傳物質(zhì)?!?/p>

3、 絲lie霉素-C的影響:飼養(yǎng)層細(xì)胞需要用到絲lie霉素-C,該物質(zhì)可能會(huì)影響干細(xì)胞的增殖。

4、 異種抗原及污染的影響:飼養(yǎng)層細(xì)胞作為異種抗原也會(huì)影響干細(xì)胞的健康,還有發(fā)生細(xì)胞間融、引入其他動(dòng)物源性病原體,給臨床移植治療帶來(lái)風(fēng)險(xiǎn)。

5、 所用試劑復(fù)雜,批次不可控:所用材料的批次之間的波動(dòng),限制了培養(yǎng)物之間的可重復(fù)性。

6、 實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng),培養(yǎng)基配制復(fù)雜:在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,添加例如白血病抑制因子(LIF)[6]這樣的多功能細(xì)胞因子,但無(wú)論進(jìn)口還是國(guó)產(chǎn)的產(chǎn)品,都不免有價(jià)格高昂的缺點(diǎn)。而自己配制,又會(huì)面臨操作繁瑣、易污染等問(wèn)題。飼養(yǎng)層培養(yǎng)從培養(yǎng)飼養(yǎng)細(xì)胞開(kāi)始,至少需要一周時(shí)間才能得到所需的干細(xì)胞,周期過(guò)長(zhǎng)。

/////

02

無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)

無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)類(lèi)似普通細(xì)胞培養(yǎng),主要分為以下幾個(gè)步驟:培養(yǎng)瓶預(yù)處理、配制培養(yǎng)基、消化/復(fù)蘇干細(xì)胞、接種、培養(yǎng)。

相較于飼養(yǎng)層培養(yǎng)法,無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)法的優(yōu)點(diǎn)顯而易見(jiàn):更加簡(jiǎn)便、節(jié)省時(shí)間;但缺點(diǎn)也十分明顯:

1、 培養(yǎng)的細(xì)胞質(zhì)量不穩(wěn)定:由于自行配制的培養(yǎng)基,不可控因素較多,缺少營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞對(duì)的存在,干細(xì)胞生長(zhǎng)狀況也不穩(wěn)定,直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2、 成本高昂:商品化的培養(yǎng)基,根據(jù)品質(zhì)不同,價(jià)格也是從幾百元到幾千元不等,直接增加了干細(xì)胞的培養(yǎng)成本。

3、 需要不斷對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行調(diào)整,對(duì)實(shí)驗(yàn)人員有很高的要求:無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)法需要人為添加各種各樣的細(xì)胞因子,不同的干細(xì)胞還需要進(jìn)行細(xì)微的調(diào)整以適應(yīng)不同的生長(zhǎng)需求,因此培養(yǎng)難度更高,對(duì)技術(shù)人員的操作水平及經(jīng)驗(yàn)有很高的要求


被部长玩的漂亮人妻| 永久免费观看不收费的软件app | 图片区小说区另类春色首页| 耽肉高H喷汁呻吟体育生| 女の乳搾りです在线观看| 警察受被粗汉H玩松了尿进去双性 熟妇的滚烫的肉唇翻进翻出 | 欧美电影在线观看| 性少妇VIDEOXXX欧美69| 啊灬用力灬啊灬啊灬啊灬 | 色欲久久久天天天综合网精品| YY6080韩国三级理论无码| 哔哩哔哩在线看免费观看 | 欧美一区二区AV人片在线观看| 亚洲中文无码亚洲人成软件| 国产精品揄拍100视频| 少妇被多人C夜夜爽爽AV| 精品国精品国产自在久国产| 一女被两根凶猛挺进动态图| 在办公室伦流澡到高潮H| 国产香蕉尹人视频在线| 丰满少妇高潮惨叫久久久| 色噜噜狠狠一区二区三区| 中文无码熟妇人妻AV在线| 国际精品鲁一鲁一区二区| 三男一女做2爱A片免费视频| 精品国产一区二区三区免费 | 日本SM/羞辱/调教/捆绑视频| 男朋友舌头伸到下面很肿胀| 老师黑色双开真丝旗袍 | 国产乱妇无码大片在线观看| 国产成人精品视频a片西瓜视频 | 自己撅起来乖乖挨C烂H| 日韩一区二区三区精品无码视频| 亚洲欧美精品午睡沙发| 成人区色情综合小说| AV无码AV天天AV天天爽| 久久99精品久久久学生| 亚洲精品无码AV人在线观看国产| 亚洲AV无码AV吞精久久| 免费漫画网站| 99久久久无码国产精品6|