支原體檢測(cè)方法

理論上，檢測(cè)細(xì)胞或相關(guān)培養(yǎng)產(chǎn)品中，是否含有支原體的方法有很多，染色法、培養(yǎng)法、核酸法、ELISA法等，各有其優(yōu)缺點(diǎn)。

干細(xì)胞治療項(xiàng)目、免疫細(xì)胞治療項(xiàng)目、CAR-T項(xiàng)目、抗體藥生產(chǎn)、疫苗生產(chǎn)，另外還有一些重要的細(xì)胞培養(yǎng)，例如細(xì)胞典藏項(xiàng)目登，都需要對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞或收獲的產(chǎn)物，完成準(zhǔn)確的支原體檢測(cè)，以確保產(chǎn)物沒有支原體污染。

一般來說，需要檢測(cè)方法應(yīng)具備以下特點(diǎn)：

（1）?結(jié)果準(zhǔn)確

（2）最好還操作簡(jiǎn)便，出結(jié)果快

（3）需要時(shí)，還需有方法驗(yàn)證，符合國(guó)際或國(guó)內(nèi)《藥典》的要求。

因此，綜合考慮，核酸法支原體檢測(cè)，成為更多實(shí)驗(yàn)人員的選擇。

核酸法檢測(cè)支原體，推薦使用商品化的檢測(cè)試劑盒，經(jīng)過市場(chǎng)考驗(yàn)，結(jié)果更穩(wěn)定。

支原體核酸法

檢測(cè)試劑盒

以德國(guó)MB支原體檢測(cè)相關(guān)產(chǎn)品為例，簡(jiǎn)述常見的幾種檢測(cè)用試劑盒。

選購(gòu)時(shí)，需要從自身實(shí)驗(yàn)需求出發(fā)，選擇能夠?qū)崿F(xiàn)自己實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)的產(chǎn)品?？偟膩碚f，qPCR法更適合定量實(shí)驗(yàn)；常規(guī)PCR法更適合只需定性的實(shí)驗(yàn)。

一、qPCR經(jīng)典法試劑盒：

Venor® Gem qEP

①經(jīng)典法qPCR試劑盒，遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性，一次檢測(cè)即可涵蓋了所有可能感染細(xì)胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體），根據(jù)序列一致性，至少可以檢測(cè)到107種支原體物種。操作簡(jiǎn)單，易于觀察。

③高靈敏度，MB公司的經(jīng)典法試劑盒檢測(cè)限可達(dá)到≤10CFU/ml。

④該試劑盒可與絕大多數(shù)、能夠檢測(cè)熒光染料 FAM 和 HEX的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀結(jié)合使用。

二、常規(guī)PCR經(jīng)典法試劑盒

Venor® Gem Classic

①內(nèi)控對(duì)照為獨(dú)立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

②高特異性，僅一條陽(yáng)性對(duì)照條帶，即可涵蓋所有可能感染細(xì)胞的支原體物種。操作簡(jiǎn)單，易于觀察。

③高靈敏度。

④歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測(cè)出1種脲原體、7種無(wú)膽甾原體和85種支原體，與細(xì)胞和真核DNA無(wú)交叉反應(yīng)。

三、常規(guī)PCR預(yù)分裝法試劑盒

Venor® GeM Advance

①內(nèi)控對(duì)照已加在預(yù)混液中，無(wú)需另外配置，使用便捷。

②高特異性，僅一條陽(yáng)性對(duì)照條帶，即可涵蓋所有可能感染細(xì)胞的支原體物種。操作簡(jiǎn)單，易于觀察。

③高靈敏度。

④歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測(cè)出1種脲原體、7種無(wú)膽甾原體和85種支原體。

⑤各類試劑預(yù)先包被分裝在PCR管中，無(wú)需將預(yù)混液再進(jìn)行分裝，節(jié)約時(shí)間，減少污染。

⑥凝膠上樣緩沖液和染料已預(yù)混在反應(yīng)緩沖液中。PCR反應(yīng)結(jié)束后，產(chǎn)物可直接上樣到瓊脂糖凝膠上。簡(jiǎn)化操作步驟，節(jié)約時(shí)間。

四、常規(guī)PCR一步法試劑盒

Venor® GeM OneStep

①內(nèi)控對(duì)照已加在預(yù)混液中，無(wú)需另外配置，使用便捷。

②高特異性，僅一條陽(yáng)性對(duì)照條帶，即可涵蓋所有可能感染細(xì)胞的支原體物種。

操作簡(jiǎn)單，易于觀察。

③高靈敏度，1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。

④歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測(cè)出1種脲原體、7種無(wú)膽甾原體和85種支原體。