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搞定細(xì)胞中的支原體,看這篇就夠了!

更新時間:2023-04-15  |  點擊率:689

支原體污染解決方案



支原體污染在世界范圍內(nèi)的細(xì)胞實驗室中,屬于比較常見的一類污染。細(xì)胞污染一旦污染了支原體,會給細(xì)胞培養(yǎng)帶來一系列嚴(yán)重的后果。


本期內(nèi)容,就細(xì)胞培養(yǎng)過程中,支原體污染的危害、如何預(yù)防支原體污染、如何祛除支原體污染做解讀。

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支原體污染的危害


支原體個頭很小,可以感染多種真核細(xì)胞系,包括研究中常用的人類和動物細(xì)胞系。雖然支原體感染的前期,可能并不總是導(dǎo)致受感染細(xì)胞發(fā)生明顯變化,但它會對細(xì)胞生理學(xué)和實驗結(jié)果產(chǎn)生重大影響。


支原體影響細(xì)胞生長的主要方式之一是改變細(xì)胞代謝。支原體已被證明會耗盡培養(yǎng)基中的葡萄糖和氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì),從而導(dǎo)致細(xì)胞生長和增殖減少。此外,支原體會產(chǎn)生對細(xì)胞有毒的代謝廢物,例如過氧化氫和氨。


支原體感染還可以改變受感染細(xì)胞中基因和蛋白質(zhì)的表達(dá)。研究表明,支原體可以誘導(dǎo)基因表達(dá)和可變剪接的變化,從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)表達(dá)和細(xì)胞功能的改變。例如,支原體感染已被證明可以下調(diào)參與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的基因,并上調(diào)參與炎癥和免疫反應(yīng)的基因。


支原體影響細(xì)胞生長的另一種方式是誘導(dǎo)細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)。支原體感染已被證明可激活細(xì)胞應(yīng)激通路,如未折疊蛋白反應(yīng)和自噬,這可導(dǎo)致細(xì)胞功能改變和細(xì)胞活力降低。


支原體還會影響受感染細(xì)胞在檢測和實驗中的行為。支原體污染會導(dǎo)致實驗結(jié)果的可變性增加、再現(xiàn)性降低以及假陽性或假陰性結(jié)果的產(chǎn)生。此外,支原體可以改變細(xì)胞對藥物和其他刺激的反應(yīng),這可能導(dǎo)致關(guān)于藥物療效或毒性的錯誤結(jié)論。


總之,支原體污染會對細(xì)胞生長和行為以及實驗結(jié)果產(chǎn)生重大影響。研究人員應(yīng)采取適當(dāng)措施預(yù)防、檢測支原體污染。

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支原體污染的預(yù)防


防止支原體污染的第一步是保持無菌實驗室環(huán)境。所有設(shè)備和表面都必須使用適當(dāng)?shù)脑噭┒ㄆ谇鍧嵑拖荆囵B(yǎng)箱水槽等水浴環(huán)境,也應(yīng)防止消毒劑成分。此外,在處理細(xì)胞培養(yǎng)物時應(yīng)佩戴手套和實驗室外套等個人防護(hù)設(shè)備,以防止意外污染。




德國Minerva Biolabs生產(chǎn)

支原體祛除噴霧

Mycoplasma-off




德國Minerva Biolabs生產(chǎn)

水槽支原體預(yù)防試劑

Water Shield


另一個重要措施是在細(xì)胞培養(yǎng)過程的所有步驟中使用無菌試劑和培養(yǎng)基。這包括使用無菌移液器、過濾器和其他一次性設(shè)備。所有培養(yǎng)基和試劑都應(yīng)適當(dāng)儲存以防止污染。


應(yīng)盡可能使用之前經(jīng)過測試和證明不含支原體的細(xì)胞系。定期檢測細(xì)胞培養(yǎng)物是否存在支原體污染也很重要,即使使用經(jīng)過認(rèn)證的細(xì)胞系也是如此。

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支原體的檢測


如何檢測支原體前期內(nèi)容我們也有詳細(xì)講過,有常規(guī)PCR檢測試劑盒以及qPCR檢測試劑盒兩大類可供選擇。




具體內(nèi)容可以參考下面這篇文章:

『支原體檢測方法』到底應(yīng)該怎樣選?

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支原體的祛除


如果在細(xì)胞培養(yǎng)物中檢測到支原體污染,必須立即采取措施消除污染。第一步是將受影響的培養(yǎng)物與其他細(xì)胞培養(yǎng)物隔離,以防止污染擴(kuò)散。


受影響的培養(yǎng)物應(yīng)該被丟棄,并對環(huán)境進(jìn)行清潔,參考支原體預(yù)防這一章節(jié)的內(nèi)容。新的培養(yǎng)物應(yīng)該從冷凍儲備或無支原體細(xì)胞系開始。


針對不同類型的培養(yǎng)物,還可選擇用于細(xì)胞中的支原體祛除試劑:


Zell Shield



對于費力擴(kuò)增的細(xì)胞(如已染,或經(jīng)過體外刺激),如果細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)有支原體污染,但此細(xì)胞又不愿丟棄,希望繼續(xù)培養(yǎng),推薦使用MB公司生產(chǎn)的復(fù)合抗生素Zell Shield。


Mynox




無法長期培養(yǎng)的珍貴樣本或病毒收獲液,則推薦使用德國MB公司的Mynox® ,處理3小時,直接殺除。


Mynox Gold




可以培養(yǎng)超過一個月的細(xì)胞,則推薦使用德國MB公司的Mynox® Gold,直接殺除+鞏固防護(hù)兩步處理。


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