支原體（mycoplasma）是一類沒有細胞壁、高度多形性、能通過濾菌器、可用人工培養(yǎng)基部分培養(yǎng)增殖的，原核細胞型微生物。支原體也是造成生物學(xué)實驗室中，細胞污染的“主力選手"之一。

在普通光學(xué)顯微鏡下，幾乎看不到支原體的身影，因此如果細胞被支原體污染，前期很難被發(fā)現(xiàn)，而支原體污染，又會對細胞實驗產(chǎn)生嚴重的影響，包括但不限于以下幾點：

1、支原體感染細胞株會導(dǎo)致細胞失去正常生長和功能，影響實驗結(jié)果的可靠性和準確性。它可以導(dǎo)致細胞形態(tài)的改變、細胞增殖的異常以及細胞功能的異常。

2、支原體在細胞培養(yǎng)中傳播非常迅速，很容易通過細胞培養(yǎng)物、細胞懸液、細胞培養(yǎng)用具等途徑傳播到其他細胞培養(yǎng)中，進一步污染更多的細胞株。

3、支原體感染可能導(dǎo)致實驗結(jié)果的誤解，因為實驗結(jié)果中的觀察結(jié)果可能不再是由所研究的細胞本身導(dǎo)致的，而是由支原體感染導(dǎo)致的變化。

因此，要通過有效、安全、高效的手段，預(yù)防/清除支原體污染。關(guān)于與支原體的“大戰(zhàn)"，我們總結(jié)了以下幾個關(guān)鍵點，希望本期“支原體清除計劃"可以為大家的細胞實驗帶來幫助。

Round 1：實驗室環(huán)境的清潔

細胞實驗，需要在嚴格無菌的環(huán)境下進行。因此，維持實驗室的無菌環(huán)境十分重要。實驗環(huán)境包括實驗空間、實驗室內(nèi)的儀器設(shè)備、實驗人員。

可采用甲醛高錳酸鉀熏蒸消毒的方法對實驗室內(nèi)部空間進行消毒，消毒期間需人員撤離，密閉消毒空間24h以上，該方法雖然能有效對實驗空間進行清潔消毒，但甲醛有刺激氣味，對人和細胞都有毒性作用。細胞間1-2周無法使用，因此更推薦用紫外線燈進行照射滅菌。在每次實驗開始前，打開紫外線燈，設(shè)置好安全標識，照射實驗室內(nèi)部空間30分鐘以上，也能達到不錯的滅菌效果。

對于實驗室內(nèi)的儀器設(shè)備，可采用消毒液、75%酒精擦拭等方法進行消毒。該方法中所使用的消毒試劑，多數(shù)也都有揮發(fā)性，對操作人員有毒性作用，且對部分微生物無效。

因此，推薦使用更為專業(yè)的微生物祛除試劑：Mycoplasma-off支原體祛除噴霧劑（即用型），含有支原體殺除劑Mynox®，可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體。，并且對絕大部分真菌細菌甚至是病毒都有效。

使用起來便捷高效，將Mycoplasma-Off®均勻噴于待消毒的潔凈臺或?qū)嶒炘O(shè)備和器材的表面，等待5-10分鐘，可用用干燥紙巾將已噴過Mycoplasma-Off®的潔凈臺或?qū)嶒炘O(shè)備和器材的表面搽拭干凈即可。

培養(yǎng)箱水槽、水浴鍋這類衛(wèi)生死角，也應(yīng)做好支原體預(yù)防工作，定期更換無菌水，添加用于水槽的支原體清除試劑：Water Shield™  。

實驗人員在細胞實驗開始前，也應(yīng)做好相應(yīng)的消毒防護。使用適當?shù)膫€人防護裝備，如手套、口罩和防護服等；以及遵循良好的實驗室操作，如避免不同來源的培養(yǎng)物之間的接觸；在實驗過程中，嚴格遵守實驗室中物品擺放準則，以培養(yǎng)箱舉例：培養(yǎng)皿擺放密度應(yīng)合理，宜少不宜多等。

Round 2：選擇高品質(zhì)的實驗試劑

實驗試劑也是細胞支原體污染的來源之一，選擇合規(guī)的、高品質(zhì)的實驗試劑也是預(yù)防支原體污染的關(guān)鍵點之一。

胎牛血清作為細胞培養(yǎng)實驗中重要的添加成分，含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，其組成成份大部分已知，但還有一部分尚不清楚，這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。其品質(zhì)直接影響實驗結(jié)果的穩(wěn)定性。

高品質(zhì)的血清，應(yīng)通過各類嚴格的質(zhì)量檢測、各項指標均應(yīng)符合標準并能提供檢測報告。其中，微生物及病毒相關(guān)的檢測項目，均應(yīng)呈現(xiàn)“未檢出"。

Ausbian進口特級胎牛血清，不僅在微生物檢測指標方面符合標準，內(nèi)毒素含量也很低，≤3EU/ml，澳洲血源，全程冷鏈運輸，盡可能避免反復(fù)凍融的情況發(fā)生。

Round 3：監(jiān)控細胞狀態(tài)

在進行細胞實驗期間，要密切監(jiān)測細胞培養(yǎng)物的污染跡象，對于細胞狀態(tài)突變保持警惕（如培養(yǎng)基頻繁變色、細胞生長緩慢等）。在細胞復(fù)蘇、細胞凍存或者進行其他關(guān)鍵的實驗操作步驟前，如條件允許，建議對細胞進行取樣，進行支原體檢測，包括常規(guī)PCR和qPCR等方法，方便快捷。

如果需要進行方法學(xué)驗證，則推薦使用Venor®GeM qEP支原體qPCR檢測試劑盒。配合Venor®GeM Sample Preparation支原體DNA提取試劑盒以及支原體標準品一起使用，完成方法學(xué)驗證。

Round 4：支原體祛除 

對于費力擴增的細胞（如已轉(zhuǎn)染，或經(jīng)過體外刺激），如果細胞中發(fā)現(xiàn)有支原體污染，但此細胞又不愿丟棄，希望繼續(xù)培養(yǎng)，推薦使用MB公司生產(chǎn)的復(fù)合抗生素Zell Shield®。在每次使用Zell Shield®之前，細胞傳代時，先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法"處理好細胞，再使用加了Zell Shield®的培養(yǎng)基養(yǎng)細胞，能達到更好的祛除支原體的效果。

非常珍貴的細胞或不易獲得的生物樣本，被支原體污染了，但需要挽救，不能丟棄， 例如：稀有的細胞種子。可采用支原體清除法。 若是可以培養(yǎng)超過一個月的細胞，則推薦使用德國MB公司的Mynox® Gold，直接殺除+鞏固防護兩步處理。

若是無法長期培養(yǎng)的珍貴樣本或病毒收獲液，則推薦使用德國MB公司的Mynox® ，處理3小時，直接殺除。