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發(fā)現(xiàn)細胞支原體污染,要做哪些事情能預(yù)防?

更新時間:2024-10-09  |  點擊率:143
細胞支原體污染是指在細胞培養(yǎng)過程中,由于外界環(huán)境、操作不當(dāng)?shù)仍?,?dǎo)致支原體等微生物侵入細胞內(nèi)部,影響細胞的生長和繁殖。支原體是一種無細胞壁的微生物,具有較強的抗藥性和易感性,容易在細胞培養(yǎng)過程中引起污染。因此,在進行細胞培養(yǎng)時,需要嚴格控制操作過程,防止支原體污染的發(fā)生。  
一、細胞支原體污染的原因  
外界環(huán)境:支原體廣泛存在于自然界中,如土壤、水源、空氣等。當(dāng)細胞培養(yǎng)過程中使用的試劑、培養(yǎng)基、器械等受到支原體污染時,可能導(dǎo)致細胞支原體污染。  
操作不當(dāng):細胞培養(yǎng)過程中,操作人員的手、衣物、器械等可能帶有支原體。如果操作不當(dāng),如未進行嚴格的手部消毒、未使用無菌器械等,可能導(dǎo)致支原體污染。  
培養(yǎng)條件:支原體在適宜的溫度、濕度等條件下容易生長繁殖。如果細胞培養(yǎng)條件不適宜,如溫度過高、濕度過大等,可能導(dǎo)致支原體污染。  
細胞來源:部分細胞來源可能已經(jīng)受到支原體污染。如果使用這些受污染的細胞進行培養(yǎng),可能導(dǎo)致支原體污染。  
二、檢測方法  
形態(tài)學(xué)檢測:通過顯微鏡觀察細胞形態(tài),發(fā)現(xiàn)異常的細胞形態(tài),如腫脹、變形、脫落等,可能是支原體污染的表現(xiàn)。  
生化檢測:通過檢測細胞培養(yǎng)上清液中的代謝產(chǎn)物,如乳酸脫氫酶(LDH)、堿性磷酸酶(ALP)等,判斷是否存在支原體污染。  
PCR檢測:通過PCR技術(shù)檢測細胞培養(yǎng)上清液或細胞內(nèi)的支原體DNA,以確定是否存在支原體污染。  
免疫學(xué)檢測:通過免疫熒光、ELISA等方法檢測細胞培養(yǎng)上清液或細胞內(nèi)的支原體抗原,以確定是否存在支原體污染。  
三、細胞支原體污染的預(yù)防措施  
嚴格控制操作過程:操作人員應(yīng)進行嚴格的手部消毒,使用無菌器械和培養(yǎng)皿,避免交叉污染。  
使用無菌試劑和培養(yǎng)基:確保使用的試劑和培養(yǎng)基未受到支原體污染,可進行無菌處理或使用一次性產(chǎn)品。  
優(yōu)化培養(yǎng)條件:保持適宜的溫度、濕度等條件,避免細胞過度生長或死亡,降低支原體生長的機會。  
選擇優(yōu)質(zhì)細胞來源:盡量選擇經(jīng)過嚴格篩選的優(yōu)質(zhì)細胞來源,降低支原體污染的風(fēng)險。  
四、處理措施  
更換培養(yǎng)基:發(fā)現(xiàn)后,應(yīng)立即更換新的無菌培養(yǎng)基,避免支原體繼續(xù)生長繁殖。  
使用抗生素:根據(jù)支原體的敏感性選擇合適的抗生素進行治療,如紅霉素、四環(huán)素等。但需注意抗生素可能對細胞產(chǎn)生毒性作用,需謹慎使用。  
清除受污染的細胞:對于嚴重受污染的細胞,可使用胰酶消化法或機械刮除法清除受污染的細胞。  
重復(fù)檢測:處理后需重新進行支原體檢測,確保污染已得到有效控制。
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