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Biocoll細(xì)胞分離液操作步驟及注意事項(xiàng)詳解

更新時(shí)間:2020-10-26  |  點(diǎn)擊率:1432
   如何從血液中獲取單個(gè)核細(xì)胞呢?PBMC簡(jiǎn)單常用的方法是利用密度梯度介質(zhì)進(jìn)行分離,利用密度與淋巴細(xì)胞相近且近于等滲的Biocoll細(xì)胞分離液進(jìn)行分離,其成分是高分子的聚蔗糖和泛影酸鈉。
  Biocoll細(xì)胞分離液操作步驟及注意:
  1、取全血,使用等量PBS稀釋。(全血:HBSS=1:1)
  2、取離心管,加入與血稀釋液等量的PBS于管底,將血液稀釋液小心加至PBS液面上層。(小心不要使兩種溶液混合,吸頭接近液面,貼壁緩慢加入,尤其是兩種溶液剛接觸到的時(shí)候,一定要慢!慢!再慢?。?/div>
  3、離心:800g,30min,需要將制動(dòng)降至低,即離心機(jī)自然降速至0,離心完畢將得到如圖所示分層(一定要自然降速,或者只有1-2成的制動(dòng))
  4、吸取白膜層至新15mL離心管中。(白膜層為如圖所示部位,一定要小心的吸取,不要吸到血漿和下層的Biocoll細(xì)胞分離液也不要將各層溶液攪混,吸取的時(shí)候可以先將上層血漿吸掉,這樣更好操作。)
  5、白膜層液體加10~15mlPBS離心,300g,10min,棄上清。沉淀再加PBS清洗一次,棄上清。
  6、沉淀加入正常培養(yǎng)的*培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),2~3小時(shí),使單核細(xì)胞貼壁。
  7、鏡下觀察細(xì)胞貼壁后,更換培養(yǎng)基,去除未貼壁細(xì)胞,保留下來的即為所需的單核細(xì)胞。 
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