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支原體祛除劑使用攻略

更新時(shí)間:2022-04-18  |  點(diǎn)擊率:590

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)支原體的影響"

支原體在自然界廣泛存在,尤其可以寄生于人、哺乳動(dòng)物、植物、昆蟲等物種。

人的口腔、鼻腔、皮膚、呼吸道等均可攜帶支原體,支原體可以說是無處不在,在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)過程中,操作稍有不慎,造成細(xì)胞支原體感染的風(fēng)險(xiǎn)就大大增加。

在細(xì)胞間里,支原體對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的污染風(fēng)險(xiǎn)不容忽視。

首先細(xì)胞感染支原體早期沒有顯著表現(xiàn)。等到實(shí)驗(yàn)人員發(fā)現(xiàn)細(xì)胞異常了,此時(shí)細(xì)胞基本已經(jīng)“病入膏肓",感染十分嚴(yán)重了。

其次,常規(guī)的抗生素對(duì)支原體無效。一旦發(fā)生污染,支原體會(huì)影響細(xì)胞基因表達(dá)和營(yíng)養(yǎng)代謝改變,嚴(yán)重干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果(包括細(xì)胞轉(zhuǎn)染和病毒包被)

因此,支原體污染對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)影響重大,一定要重視起來!


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有效去除支原體的方法

"如果培養(yǎng)的細(xì)胞發(fā)生了支原體污染的情況,我們首先建議大家丟棄被污染的細(xì)胞,并進(jìn)行*的消殺。

如果細(xì)胞很重要,不能丟棄,那么推薦使用專業(yè)的支原體祛除試劑,既安全,又高效(畢竟甲醛熏蒸、次氯酸鈉、酒精這些東西,既容易對(duì)實(shí)驗(yàn)人員造成損害,效率也比較低)

以支原體祛除劑Zell Shield®為例,進(jìn)行說明。

Zell Shield®是一種復(fù)合抗生素類產(chǎn)品,加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中,通過阻止支原體、真菌、霉菌、致命病菌增殖過程中DNA及蛋白的合成,有效抑制微生物的增殖,對(duì)大多數(shù)革蘭氏陽性和陰性細(xì)菌、霉菌、酵母、原蟲也同樣有效。

Zell Shield®適合如下兩種情況:

1)培養(yǎng)的細(xì)胞面臨支原體的高污染風(fēng)險(xiǎn),尤其是取自生物有機(jī)體的原代細(xì)胞。這時(shí)建議在培養(yǎng)基中加1%的Zell Shield®

2)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞已被支原體污染,而不愿意丟棄(如已轉(zhuǎn)染,已經(jīng)體外刺激或已費(fèi)力擴(kuò)增的細(xì)胞),希望繼續(xù)培養(yǎng),這時(shí)可采用下面的“懸浮沖洗法"進(jìn)行支原體的祛除。

對(duì)于非常珍貴的細(xì)胞或不易獲得的生物樣品(如細(xì)胞種子),發(fā)現(xiàn)有支原體污染,希望挽救。這時(shí)我們推薦使用MB公司的Mynox®或Mynox Gold®進(jìn)行支原體的祛除。

Zell Shield®的用法如下:

1)常規(guī)使用

Zell Shield®為-18℃避光保存。使用前,建議融化分裝。避免反復(fù)凍融。

Zell Shield®按1:100直接加入到新鮮配制的培養(yǎng)基。例如:500ml培養(yǎng)基中添加5ml Zell Shield®,混合后在2~8℃保存可至少4周。37℃進(jìn)行培養(yǎng)時(shí),最多7天需要更換新的含有Zell Shield®的培養(yǎng)基,以獲得最大的保護(hù)。

支原體祛除劑使用攻略


說明:Zell Shield®在培養(yǎng)基過濾前或過濾后加均可。如果培養(yǎng)基尚未無菌過濾,可在加入Zellshield®后再進(jìn)行無菌過濾。

一般情況下,使用了Zell Shield®,就不必再額外添加雙抗了。


2)懸浮沖洗法(適合已有支原體污染的細(xì)胞)

約98%的支原體存在于細(xì)胞表面和細(xì)胞間隙。細(xì)胞傳代前,用干凈的PBS懸浮沖洗3次,就能把70%以上的支原體沖洗下來,再通過低速離心,棄上清,即可祛除大部分支原體(離心后細(xì)胞沉淀,沖洗下來的支原體在上清中)。再繼續(xù)用含1%Zell Shield®的培養(yǎng)基持續(xù)培養(yǎng)。細(xì)胞再連續(xù)傳代3次,每次都用PBS對(duì)細(xì)胞進(jìn)行懸浮沖洗,并用含1%Zell Shield®的培養(yǎng)基培養(yǎng)(見下圖),即可逐漸祛除細(xì)胞中的支原體。


另外,需要說明的是ZellShield®含有氟喹諾酮類藥物,可與其他抗生素聯(lián)合使用,作為耐藥性標(biāo)記。其他抗生素成分不用作耐藥性標(biāo)記。


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